CRISPR Gene Knockout Kit 

常見的CRISPR基因敲除策略依賴于一個單一的單向導RNA（sgRNA），它產生隨機的插入/缺失。由于可能發生的編輯種類繁多且不可預測，這種策略效率低下，通常無法生成功能性的基因敲除。

基因敲除試劑盒采用了一種專有的多向導策略，由最多三個空間協調的修飾SpCas9 sgRNA組成，可誘導片段缺失。借助Synthego的Halo平臺提供動力的生物信息學設計工具，我們的設計工具生成了一個可靠地在首次嘗試中敲除任何人類或小鼠編碼蛋白基因的定制多向導sgRNA。

選擇您感興趣的基因，我們將合成您的高質量多向導SpCas9 sgRNA試劑盒！我們的基因敲除試劑盒保證適用于人類和小鼠（不包括非必要基因）。

每個試劑盒配有一個專門針對目標的多向導sgRNA管（每管最多3個sgRNA）。多向導sgRNA經過化學修飾，能夠抵抗降解并防止觸發細胞內免疫反應。為了獲得最佳效果，可以添加轉染優化試劑盒，以優化您的細胞類型。

由我們獨特的多向導設計和高質量的合成sgRNA提供支持，我們的排列式CRISPR gRNA庫由多孔板格式中的SpCas9 sgRNA組成，每孔靶向一個基因。向導序列基于專有的多向導RNA策略設計，通過生物信息學構建多達三個合成sgRNA，共同在靶基因中創建大片段缺失，從而增加功能性敲除的可能性，而不依賴于隨機插入/缺失（indel）的產生。

總體而言，這減少了假陰性的可能性，可靠地敲除任何人類或小鼠蛋白質編碼基因。我們的庫也已準備好轉染，可以復合成RNPs或直接轉染到Cas9表達細胞系中，避免了漫長的準備過程。由于它們的排列格式，無需進行繁雜的下一代測序（NGS）數據解卷來解釋結果。相反，您可以使用我們獨特的生物信息學工具——CRISPR編輯推斷（ICE），通過Sanger測序在幾秒鐘內分析您的CRISPR編輯。

結合化學和自動化，加上我們高質量的控制，我們將高質量的sgRNA高精度地放入每個孔中，使您能夠自信地在篩選中可靠地敲除目標基因，我們對此有保證（不包括非必需基因）。由于我們優化的工作流程，我們可以在7天內以無與倫比的速度交付您的排列式CRISPR gRNA庫。

憑借Synthego獨家的生物信息學工具，我們的多向導設計由最多3個針對單個感興趣基因的sgRNA組成。這些sgRNA是空間協調的，以誘導引導性修復，導致早期外顯子中的片段刪除，實現可靠的敲除。

Synthego的多向導sgRNA包括最多3個修飾的sgRNA（灰色條），它們針對單個感興趣的基因。當共轉染時，這些sgRNA在靶向基因組位點上創建并發的雙鏈斷裂（垂直虛線），從而導致一個或多個21+ bp的片段刪除。

傳統的sgRNA策略依賴于插入/缺失的生成，這并不總是能保證基因被敲除。Synthego的多向導策略可以保證100%在目標位點產生敲除，因此您可以對您的基因敲除有十足的信心。

在樹突狀細胞（通過核轉染）中，比較了兩種基因靶點（TNF、TLR4）的單向導與多向導sgRNA編輯。通過MiSeq對靶向位點進行測序分析編輯效率，并根據編輯類型（無插入/缺失、大片段刪除≥50bp、小片段刪除<50bp、插入）對測序結果進行分類。堆疊柱形圖顯示了分配給每種結果的讀取序列的百分比。每個靶點的多向導sgRNA導致了大于75%的大片段刪除結果。該研究由來自加州大學舊金山分校的Marco Jost博士和Jonathan Weissman博士，以及斯坦福大學的Amy Jacobson博士和Michael Fischbach博士進行。

在非克隆細胞系中，經過轉染七天后，多向導sgRNA編輯引起的片段刪除導致蛋白質敲除。

多向導sgRNA導致基因破壞和蛋白質表達喪失。左圖：采用多向導方法編輯了三個基因（CDK9、CINP、COASY），結果顯示敲除效率高，表現為敲除（KO）得分（表示導致假設敲除的序列百分比，包括片段刪除和誘導移碼插入）。右圖：Western印跡顯示相對于模擬處理的細胞（無sgRNA或Cas9），相應蛋白質的喪失。HEK293細胞通過核轉染獲得多向導sgRNAs。轉染后七天，通過免疫印跡分析評估了細胞中蛋白質靶標的存在（同一時間段內GAPDH表達用于歸一化）。

將您的CRISPR敲除策略升級至適用于任何人類或小鼠的蛋白編碼基因。相較于依賴單個sgRNA產生敲除的策略，Synthego的多向導設計始終能夠實現高敲除（KO）得分，使Gene Knockout Kit v2成為理想的敲除解決方案。

在對32個基因靶點進行評估時，以多向導引入的sgRNA相較于單個sgRNA，顯示出29.2%更高的中位敲除效率（KO得分為89.9%，單個sgRNA為69.6%）。